1常用器械及使用方法

       常用的器械有解剖刀、外科手术剪、脑刀、骨剪、镊子、骨锯、探针、拉钩、载玻片、放大镜、注射器等。

       1.解剖刀  主要用于切开和分割软组织，刀片宜用血管钳(持针钳也可)夹持安装，避免割伤手指。常用的持刀法有以下4种：执弓式、抓持式、执笔式、反挑式。

       2.手术剪  用于分离与剪开。

       3.血管钳  用于分离和钳夹组织，钳夹缝合针和布巾等。

       4.手术镊  用于夹持组织，以利于解剖和缝合。

       5.拉钩  用于牵引和暴露。

       2病理取材的基本要求

       从大体标本上按照病理检查的目的和要求切取适当大小的组织块，供制片进行显微镜检查。为达到诊断的目的，取得合适的组织是关键。这不仅要求材料要尽可能新鲜，而且要有一定的数量和良好的质量。

       1.活检组织标本在手术切下后应立即放入10％福尔马林固定(电子显微镜标本则用适当的固定液固定)。尸检标本应争取在死亡后尽可能短的时间内取材。

       2.通常选择正常与病变交界处组织，即包括病变本身及病变周围组织。

       3.对照组动物相同器官取材时，选材部位应尽量一致。

       4.肉眼看不到明显的病变时，各试验组选取标本位置应一致。

       5.所选组织应包括脏器全部层次结构或重要结构，如肾应包括皮质、髓质和肾盂。

       6.体积大和分叶的器官，应视不同组织选取多个部位，小器官可整体取材并固定，如淋巴结、扁桃体、甲状腺等。

       7.胃肠标本应将内容物冲洗掉，以免内容物影响组织固定，产生自溶。

       8.所取材料应尽量保持肉眼标本的完整性，不宜过厚或过薄，一般厚约3～5mm，大小为1.5～2cm2。

       9.切取组织时不要挤压，应使用锋利刀具，少用剪刀，勿选用被器械钳压过的部位。

       10.标本取材要熟练，尽可能快地完成整个过程，特别是易自溶的组织，如肠道、脑、腺体等。

       11.第一次取材组织不能作出确诊时，须再次甚至多次取材。每次取材均应将送检单加以记录。

       12.组织取材完毕，标本应按序存放，并加足固定液以备复查之用。通常保留1个月后，再清理销毁。

       3病理取材的基本操作

       1.切开  在同一平面上时，先绷紧组织，将刀刃与平面垂直，用力要得当，一次垂直切开，切口整齐而不偏斜，禁止斜切和锯切，以减少损伤。切开多层组织时，一般应按组织层次分层切开，避免损伤深层组织器官。

       2.组织分离法  可用锐性分离法，使用刀、剪等锐性器械直接切割，如皮肤、黏膜、精细结构和紧密连接组织的分离；也可用钝性分离法，使用分柄、止血钳、剥离器、手指等分离，如肌肉、疏松结缔组织等的分离。

       3.结扎  用丝线打结的方法结扎组织和血管，用于缝合器官和皮肤。

       4.止血  大量出血导致胸、腹部积血使剖检视野模糊不清，可能会影响和干扰病变的辨别和取材，因此动物剖检有时要进行止血，常用方法有纱布块压迫止血法、钳夹止血法、结扎止血法。

       4取材程序

       剖检顺序多为先腹腔后胸腔，再脑、脊髓、骨髓、皮肤肌肉等。取材顺序基本与此相同。

       1.腹腔和腹腔器官  沿腹部正中线切开剑突至肛门之间的腹前壁，再沿最低位肋骨分别向左右两侧切开侧腹壁至脊柱两旁，完全暴露腹腔器官。观察有无积液、血液和炎性渗出物，如有则用吸管吸出，测量容积并经离心沉淀涂片检查，必要时作细菌培养。检查黏膜是否光滑，有无充血、淤血、出血、破裂、脓肿、粘连、肿瘤、寄生虫等，检查膈的紧张度及有无破裂。

       (1)脾：检查大小、厚薄、硬度、性状、色泽，是否肥厚、破裂等。然后沿长轴将脾切成两半，切面要平整，检查脾小梁、红髓、滤泡的色泽、切面的出血量。

       (2)胰腺：检查胰腺色泽和硬度，切面检查有无出血。

       (3)胃肠：检查胃的大小、胃肠道浆膜面的色泽，有无粘连、肿瘤、寄生虫结节。然后沿胃大弯、肠系膜附着部依次剪开胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠。观察胃内有无异物，内容物的气味及性状，除去内容物，检查黏膜颜色，有无充血、出血、化脓。采用边剪开边观察的办法检查肠管，观察肠内容物数量、性状，有无气体、血液、异物、寄生虫，肠黏膜皱襞有无增厚、水肿、充血、黏液量、溃疡、坏死、淋巴组织性状及有无炎症。

       (4)肾：首先检查肾的大小、硬度，被膜是否容易剥离，肾表面的色泽、平滑度，有无瘢痕、出血变化。然后检查切面皮质和髓质的色泽，有无淤血、出血、化脓和梗死。注意观察皮质和髓质交界处的切面是否隆凸，以及肾盂、输尿管、肾淋巴结的性状，有无肿瘤及寄生虫等。

       (5)肝：首先检查肝的大小、被膜的性状、边缘的厚薄、实质的硬度和色泽，以及肝淋巴结、血管、肝管等的性状。然后作切面，检查切面的出血量、色泽，肝小叶性状、有无脓肿、肝坏死等变化。

       (6)肾上腺：观察外形、大小、色泽和硬度，作纵切和横切，检查皮质和髓质的色泽及有无出血。

       2.盆腔器官

       (1)膀胱：检查膀胱的大小、尿量及色泽，黏膜有无出血、炎症和结石等。

       (2)雄性生殖器官：检查睾丸、附睾、凝固腺、前列腺有无粘连、出血、水肿、积液等。

       (3)雌性生殖器官：沿子宫体背侧剪开子宫角，检查子宫内膜的色泽、有无充血、出血、炎症等，观察卵巢和输卵管有无粘连、出血、水肿、积液等。

       3.胸腔、口腔及其器官用镊子夹住胸骨剑突，剪断膈肌与胸骨的连接，提起胸骨，在胸椎两侧分别剪断左、右侧胸壁的肋骨，取下整个胸壁，打开胸腔，依次取出胸腺和心脏。将下颌骨的两下颌支内侧与舌连接的肌肉切断，将咽、喉、气管、食管与周围组织分离，用镊子夹住气管向上提起，剪断肺与胸膜的连接韧带，然后将咽、喉、气管、食管连同整个肺一并取出。如有积液应观察其数量和性状，尽量吸取，测量容积并涂片，检查胸膜色泽，有无出血、充血或粘连。

       (1)心脏：剪开心包膜，暴露心脏，注意心包的光泽度及心包内液体的情况，心脏的大小、外形、心外膜情况。自下腔静脉入口处至右心房作直线剖开，从此直线中点沿心脏右缘剖至心尖部，从距离心尖部与心室间隔右侧1cm处平行地剖至肺动脉；检查右心房、右心室、三尖瓣、肺动脉瓣、腱索有否病变。自左、右静脉入口处将左心房直线切开，沿心脏左缘剖至心尖部，再从距离心尖部与心室间隔左侧1cm处平行地剖开左心室的前壁和主动脉，检查二尖瓣、主动脉瓣、腱索有无病变，左心房、左心室内壁有无出血和感染。自冠状动脉口起剪开前降支和旋支，在主动脉根部右侧，于右心室的心外膜找到右冠状动脉主干，先横切一刀，再剪至后降支；观察有无粥样硬化和血栓等。

       (2)口腔：检查牙齿的变化，口腔黏膜的色泽，有无外伤、溃疡和白斑，舌黏膜有无出血、外伤及舌苔的情况。

       (3)咽喉：观察喉头、会厌软骨黏膜的色泽、淋巴结的性状及喉囊有无积脓。

        (4)鼻腔：检查鼻腔和鼻中隔黏膜的色泽，有无出血、炎性水肿、结节、糜烂、溃疡穿孔及瘢痕等。

       (5)下颌及颈部淋巴结：检查下颌及颈部淋巴结的大小、硬度、有无出血和化脓等。

       (6)气管：检查气管有无出血、黏液量等。

       (7)肺：检查肺的色泽，有无出血、炎症、肺气肿、肺萎缩、肿瘤等。

       (8)其他器官：检查胸腺、甲状腺、扁桃体等的色泽，有无粘连、一出血、水肿等。

       4.颅腔及脑  以猴为例，剥离颅顶部软组织，沿眉弓至枕外隆凸上0.5cm处的连线，用弓形锯环绕该线锯开颅骨外板及板障，然后用丁字凿轻轻凿开内板，揭开颅盖，此时可见覆盖于脑表面的硬脑膜，切开硬脑膜暴露脑组织，在距颅骨锯口断端上0.5cm处，从前向后环行剪开硬脑膜，枕部的硬脑膜应保留1.5cm长，防止取脑过程向后推压脑组织时，枕骨断端损坏枕叶脑组织。向后方轻轻揭起硬脑膜及大脑镰，暴露脑组织，用手指从额骨前上方伸入颅前窝，轻轻推压大脑额叶，直至见到筛板上的嗅球为止，切断嗅丝与嗅球的联系，将嗅球与脑一齐拉起，见到视神经和视交叉时立刻停止，在脑底附近依次切断颈内动脉、视神经，再将脑向后拉，可见到垂体及漏斗，继续将脑向后拉起，切断连于脑的脑神经。从脑干腹侧面把手术刀伸入枕骨大孔，切断脊髓，即可将脑取出，用流水冲洗干净备用。新鲜脑很软，易变形和受挫伤，操作过程中必须用手扶托，取出脑后应立刻用纱布包裹，浸泡固定液中保存，以免变形。

检查软脑膜、硬脑膜血管充盈情况，脑回之间的脑沟中液体的数量与色泽，脑表面凸起或凹下的地方是否明显，可用手触摸判定其硬度。用刀将脑做一水平切面，保留胼胝体，暴露侧脑室，注意检查尾状核有无出血、软化灶，侧脑室内容物数量、性质，然后将脑做多处切面，检查有无变化。

       5不同组织的取材方法

       对犬进行尸检取材时，各器官组织的取材部位和组织块数大致如下：

       1.心和大血管：左、右心室，室间隔各1块，包括由外膜到内膜各层肌组织。左、右心耳各一块。主动脉1块。

       2.气管、肺：气管1块。肺3～5块，取自不同的叶。

       3.肝、胆囊：肝2～3块，切成正方形和长方形。胆囊1块。

       4.脾：1～2块。

       5.胰：1块。

       6.肾：右肾1块，切成正方形，左肾1块，切成长方形，都包括皮质、髓质和肾盂。

       7.膀胱：1块。

       8.肾上腺：左、右各取1块。

       9.消化道：食管、胃、十二指肠、小肠、大肠各取1块。

       10.骨：胸骨1块。

       11.胸腺、甲状腺、甲状旁腺、唾液腺：各1块。

       12.子宫：宫颈1块，宫体1～2块。

       13.睾丸、附睾或卵巢：1块。

       14.大脑、小脑、脑干：各1块。

       15.垂体：1块，前叶或包括前、后叶。

       16.视神经：1块。

       17.颈髓、胸髓、腰髓、坐骨神经：各1块。

       18.乳腺或前列腺：1块。

       19.注射部位皮肤：1块。

       20.颈部淋巴结：2～3个。

       注意如某些脏器有严重病变，或有特殊情况，应增加取材组织块数，以便彻底检查明确诊断。

       对小鼠、大鼠进行尸检取材时，各器官组织的取材部位和组织块数大致如下：

       1.心和大血管：心脏1块，其中包括左、右心室，左、右心耳，室间隔。主动脉1块。

       2.气管、肺：气管1块。肺3～5块，取自不同的叶。

       3.肝、胆囊：肝2块，切成正方形和长方形。胆囊1块。

       4.脾：1～2块，取最宽处。

       5.胰：1块。

       6.肾：右肾1块，切成正方形，左肾1块，切成长方形，都包括皮质、髓质和肾盂。

       7.膀胱：1块。

       8.肾上腺：左、右各取1块。

       9.消化道：食管、胃、空肠、回肠、结肠有淋巴结处和直肠各取1块。

       10.骨：胸骨1块。

       11.胸腺、甲状腺、甲状旁腺、唾液腺：各1块。

       12.子宫：宫颈1块，宫体1～2块。

       13.睾丸、附睾或卵巢：1块。

       14.大脑、小脑、脑干：各1块。

       15.垂体：1块，前叶或包括前、后叶。

       16.视神经：1块。

       17.颈髓、胸髓、腰髓、坐骨神经：各1块。

       18.乳腺或前列腺：1块。

       19.注射部位皮肤：1块。

       20.颈部淋巴结和肠系膜淋巴结：2～3个。

       6活检组织取材

       除以上各点外(见前述)，还应注意取材后立即用液氮速冻，而且制作冰冻切片的同一块组织一份标本要做常规石蜡切片，用于 HE染色和特殊染色等，有的还要进行免疫组织化学染色甚至电子显微镜观察，因此其组织取材要迅速完成。尽量保持组织结构完整。

      细胞标本取材和制片方法一般有印片法、穿刺法、沉淀法和活细胞标本的制备等。

      1.印片法常用于活检和手术标本，新鲜标本沿病灶中心剖开，将病灶区轻压于载片上，吹干后立即将其浸入固定液内5～10min，取出自然干燥，低温储存。

      2.穿刺法常用于淋巴结、软组织、肝、肾和肺等，穿刺液少，可直接涂在载片上，细胞尽量涂均匀。穿刺液多，细胞丰富，可滴入装有1～2ml Hanks液试管内，轻轻搅拌，以500转/分低速离心5～10min，弃上清，将沉淀制成细胞悬液(2×100000/ml)。吸一滴涂于载片上，镜检以细胞较密不重叠为好。干燥后即可固定。

      3.沉淀法主要用于胸水、腹水、尿液和脑脊液等体液多而细胞少的标本。常规细胞标本制备：细胞多时，可直接吸取少量液体直接涂片，细胞少时，可吸取底部自然沉淀液5ml，以1500转/分离心10min，再涂片。